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SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
货号 | 名称 | 规格 |
RTD6123 | SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 | 50次 |
● 产品组成：
货号 | 名称 | 规格 | 保存条件 |
AC2913-01 | 30%PAA(29:1) | 100 ml | 4℃ |
TS0588-01 | 1M Tris-HCl pH8.8 | 100 ml | RT |
TS0568-15ml | 1M Tris-HCl pH6.8 | 15 ml | RT |
SD050-5ml | 10% SDS | 5 ml | RT |
AP020P | 10% APS（干粉） | 5 ml | RT 配制后-20℃贮存 |
TA0761-01 | TEMED | 0.5 ml | 4℃，避光 |
| 说明书 | 一份 |
|
● 产品简介：
本公司提供的SDS-PAGE凝胶制备试剂盒包含凝胶制备所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水。本试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶，也可用于配制非变性(Native)PAGE凝胶。本试剂盒可配制至少30-50块常规大小的PAGE胶。
● 贮存、运输及效期：
按照标签温度贮存；常温运输；有效期一年。
● 使用说明：
一 配制分离胶：
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度（表一）。
表一 不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：
SDS-PAGE分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
6% | 50-350kD |
8% | 35-300kD |
10% | 20-150kD |
12% | 15-100kD |
15% | 10-80kD |
配制分离胶前，根据以下配方准备10% APS：
10% APS配制-5 ml：将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。
制备分离胶步骤：
1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2．根据表二，将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%APS，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4．静置15-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
表二 SDS-PAGE分离胶配方表
组份 | 不同凝胶体积对应各组份的取样量（ml） | |||
6％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml | ||||
H2O | 2.05 | 4.1 | 6.15 | 8.2 |
1M Tris-HCl pH8.8 | 1.9 | 3.8 | 5.7 | 7.6 |
30％ PAA（29:1） | 1 | 2 | 3 | 4 |
10% SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
TEMED | 0.005 | 0.01 | 0.015 | 0.02 |
10％ APS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
8％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml | ||||
H2O | 1.7 | 3.3 | 5 | 6.7 |
1M Tris-HCl pH8.8 | 1.9 | 3.8 | 5.7 | 7.6 |
30％ PAA（29:1） | 1.3 | 2.7 | 4 | 5.3 |
10% SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
TEMED | 0.005 | 0.01 | 0.015 | 0.02 |
10％ APS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
10％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml | ||||
H2O | 1.3 | 2.7 | 4 | 5.3 |
1M Tris-HCl pH8.8 | 1.9 | 3.8 | 5.7 | 7.6 |
30％ PAA（29:1） | 1.7 | 3.3 | 5 | 6.7 |
10% SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
TEMED | 0.005 | 0.01 | 0.015 | 0.02 |
10％ APS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
12％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml | ||||
H2O | 1 | 2 | 3 | 4 |
1M Tris-HCl pH8.8 | 1.9 | 3.8 | 5.7 | 7.6 |
30％ PAA（29:1） | 2 | 4 | 6 | 8 |
10% SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
TEMED | 0.003 | 0.006 | 0.009 | 0.012 |
10％ APS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
15％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml | ||||
H2O | 0.5 | 1 | 1.5 | 2 |
1M Tris-HCl pH8.8 | 1.9 | 3.8 | 5.7 | 7.6 |
30％ PAA（29:1） | 2.5 | 5 | 7.5 | 10 |
10% SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
TEMED | 0.003 | 0.006 | 0.009 | 0.012 |
10％ APS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加10% SDS即可配制成非变性PAGE胶。
二 浓缩胶制备：
1．去除覆盖在分离胶上的水层。
2．按照表三将不同成分在一个小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%过硫酸铵，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
4．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
5．静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
表三 SDS-PAGE浓缩胶(5%)配方表
组份 | 不同凝胶体积对应各组份的取样量（ml） | |||
2 ml | 4 ml | 6 ml | 10 ml | |
H2O | 1.4 | 2.7 | 4.1 | 6.8 |
1M Tris-HCl pH6.8 | 0.25 | 0.5 | 0.75 | 1.25 |
30％ PAA（29:1） | 0.33 | 0.67 | 1 | 1.7 |
10% SDS | 0.02 | 0.04 | 0.06 | 0.1 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.006 | 0.01 |
10％ APS | 0.02 | 0.04 | 0.06 | 0.1 |
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