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离心式去垢剂去除柱
货号 | 名称 | 规格 |
DD0550 | 离心式去垢剂去除柱（处理25-100 μl蛋白样品） | 10套 |
● 产品组成：
货号 | 名称 | 规格 |
DD0550-01 | 0.5 ml去垢剂去除柱（含套管） | 10套 |
DD0550-02 | 2 ml尖底离心管 | 10个 |
● 产品介绍：
离心式去垢剂去除柱能够通过离心快速去除蛋白溶液或质谱分析中肽段溶液中的常用去垢剂，包括离子型去垢剂，非离子去垢剂和两性离子去垢剂。在蛋白实验中，去垢剂在促进蛋白溶解，增加蛋白稳定性以及阻止蛋白聚集方面都有重要作用。然而，蛋白溶液中的去垢剂会对下游实验产生影响，如ELISA，等电聚焦以及质谱分析等。在质谱分析中，去垢剂会与肽段形成加合离子抑制肽段离子化，导致m/z值的迁移。因此，质谱分析中去除肽段溶液中多余的去垢剂是影响分析结果的重要因素。该去除柱可以高效（＞95%）去除样品中各种常用的去垢剂（浓度范围1-5%）。
去垢剂去除柱参数如下：
柱体积 | 填料溶胀后体积 | 处理样品体积 | 推荐起始样品浓度 | 去除效率 |
0.5 ml | ~0.6 ml | 25-100 μl | ＞0.5 μg/μl | ~95% |
● 贮存、运输和效期：
4℃贮存（不能冷冻）；常温运输；有效期1年。
● 操作步骤
一、 去垢剂去除柱预处理：
1.1 取出柱子，放入套管中。
1.2 旋开管盖，不要拧掉柱子底部堵头，加入0.4 ml 1×PBS，盖紧管盖，常温静置2 min，活化填料。
1.3 拧掉柱子底部堵头，将柱子放入套管中，1000 g 离心1 min，弃流穿液。
注：离心力不要高于1000 g，过高的离心力会损伤填料，降低去垢剂去除效率。
1.4在柱子管盖上标记填料在柱子内的倾斜方向，随后离心步骤均按同一倾斜方向在离心机内放置柱子。
1.5柱子中加入0.4 ml 1×PBS，1000 g 离心1min，弃流穿液。至此，柱子活化结束，备用。
二、样品去垢剂去除：
2.1 将柱子转移到2 ml尖底离心管中，加入25-100 μl待处理样品（样品浓度高于0.5 μg/μl），常温静置2 min。
2.2 1000g 离心2 min，收集离心管内样品。
● 注意事项：
1. 去垢剂去除效果：可以高效的（＞95%）去除样品中各种常用的去垢剂（浓度范围1-5%）。
去垢剂去除效率和蛋白回收效率 | |||
去垢剂 | 浓度 | 去除效率 | BSA回收效率 （上样量100 μg） |
SDS | 2.5% | 99% | 95% |
脱氧胆酸钠 | 5% | 99% | 99% |
CHAPS | 3% | 99% | 90% |
Triton X-100 | 2% | 99% | 87% |
NP-40 | 1% | 95% | 91% |
Brij-35 | 1% | 99% | 97% |
Tween-20 | 0.25% | 99% | 87% |
Octyl glucoside | 5% | 99% | 90% |
2. 样品处理体积要在柱子处理范围内，该去除柱最多处理体积是100 μl样品，过多会导致收集
管中液体浸没到去除柱。
3. 当样品浓度过低时（<0.5 μg/μl)，需先将样品浓缩到所需体积或所需浓度。
● 常见问题：
常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
蛋白回收率偏低 | 蛋白浓度过低（<0.5 μg/μl) | 对蛋白液进行适当浓缩 |
样品不能流穿 | 未扭掉柱子底部的堵头 | 按照步骤1.3扭掉堵头 |
● 实验示例：
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