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16.5% RealPAGE Tricine预制胶（通用型 U型玻璃板）
Ver.750167
货号 | 名称 | 规格 |
RTD6115-0016 | 16.5% RealPAGE Tricine预制胶 通用型 U型玻璃板 | 10板/盒 |
● 产品简介：
RealPAGE Tricine预制胶可以用来检测2.5-40 kD的多肽大小。预制胶玻璃板尺寸10×8.2 cm，凝胶尺寸8.2×7.2 cm，凝胶厚度1.1 mm，梳子12齿，最大上样体积30 μl，兼容伯乐电泳槽。
● 贮存、运输和效期：
4-8度贮存（切勿冷冻）；常温运输；有效期1个月。
● 使用说明：
一. 电泳缓冲液配制：
10×Tris-Tricine-SDS缓冲液（10×TTS）配制：
将10×Tris-Tricine-SDS缓冲液粉末（Cat No：CB010P）置于一干净的一升烧杯中，加入500 ml超纯水，彻底搅拌混匀，不要调节pH，即配成500 ml 10×TTS缓冲液。
1×TTS缓冲液配制
| 1×TTS配制量 500 ml | 1×TTS配制量 1000 ml |
10×TTS | 50 ml | 100 ml |
超纯水 | 450 ml | 900 ml |
注：10×Tris-Tricine-SDS缓冲液配方[1 M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; ~pH 8.3]：
Tris碱121.14g；Tricine 179.2g；SDS 10 g，用蒸馏水溶解，定容至1000 ml(不用调pH)，4-8℃贮存，使用前稀释成1×缓冲液使用。
二. 样品处理（变性还原样品）：
待上样的检测样品与2×Tricine多肽上样缓冲液[Cat:TP050]等体积混合，95℃处理5分钟后上样。蛋白Marker一般已经含有上样缓冲液，根据说明书上样（预染Marker不能加热处理，非预染Marker上样前一般要95℃处理5分钟）。
三. 电泳：
3.1 拆开预制胶包装，将预制胶安装在合适的电泳槽中。
注：伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向（左图）。六一其他系列，君意东方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。不兼容Thermol系列电泳槽。
3.2 将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液，轻柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗干净，将Marker或蛋白样品（已经过处理）加入点样孔，稳压电泳（表1），至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要150 min。
表1 多肽电泳条件
| 电压 | 电流变化 | 电泳时间 |
浓缩胶 | 恒压80 V | 起始电流：30-35 mA 终止电流：25-30 mA | ~20 min |
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| 注：等待样品指示前沿到达分离胶上沿时，调高电压 |
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分离胶 | 恒压120 V | 起始电流：40-45 mA 终止电流：15-20 mA | ~130 min |
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| 注：恒压条件下，电流不可调节，电流是逐渐降低的，观察记录电流数值。 |
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四. 染色：（使用FastBlue蛋白染色液 Cat:RTD6202）
4. 1 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），蛋白条带含量高于1μg的，染色1-2分钟即可见。
4.2 摇床上常温摇动10-15分钟，至条带清晰可见满足实验要求后停止染色。
4.3 蒸馏水漂洗凝胶，在蒸馏水中脱色摇动10-15分钟，至凝胶基本无蓝色背景，拍照记录结果。
五. 转膜：
多肽转膜选择孔径0.22 μm PVDF膜（用前用甲醇处理润湿）或0.22 μm NC膜。
5.1 半干转：
使用伯乐Trans-Blot Turbo半干转机器请选择配套的5×RealBlot快速半干转转膜缓冲液（货号：RT5030）。转膜推荐条件：一板小型凝胶（8×10 cm）恒流，1.3 A，7-10 min。
5.2 湿转：
湿转转膜缓冲液：25 mM Tris,192 mM Glycine, 20% Methanol,pH~8.3；
转膜条件：恒流200-300 mA 40-60 min
实验示例：
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