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10×CAPS转膜缓冲液
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
CP5015 | 10×CAPS转膜缓冲液 | 500 ml |
● 简介：
10×CAPS转膜缓冲液（10×CAPS Transfer Buffer）适用于蛋白电泳后凝胶上蛋白的转膜，主要成分为CAPS[3-（环己氨基）-1-丙磺酸]。本转膜液配制便捷，稀释后无需调节pH值，pH约为11.0。由于缓冲液具有较高的pH，特别适合于碱性蛋白非变性电泳后的转膜实验。另外，由于缓冲液中不含有甘氨酸，转膜后的蛋白可以进行N端测序。
该缓冲液最终可配成至少5升即用型1×缓冲液（根据需求补加甲醇）。
● 保存和运输：
4℃保存，常温运输，一年有效；配成1×含甲醇溶液后4℃贮存，1个月有效。
● 配制方法：
将10×转膜缓冲液稀释10倍，根据实验需求加或不加甲醇，即配成1×即用型转膜缓冲液。
| 1×即用型转膜缓冲液 | ||
| 500 ml | 1 L | 2 L |
10×转膜缓冲液 | 50 ml | 100 ml | 200 ml |
超纯水 | 350 ml | 700 ml | 1400 ml |
无水甲醇 | 50 ml | 100 ml | 200 ml |
| 不用调节pH | ||
注：非变性蛋白电泳转膜不加或少加甲醇；变性蛋白电泳转膜可以加终浓度低于10%甲醇。
● 使用方法：
1. 转膜方法：使用CAPS转膜缓冲液，电泳后的转膜建议用湿转法。
2. 膜的选择：转膜可以使用PVDF膜和NC膜。根据蛋白大小选择膜的孔径。一般说来，大于20 kD蛋白选择0.45 μm孔径，低于20 kD选择0.22 μm孔径。PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿活化。
3. 三明治结构：转膜三明治结构与传统转膜相同，即根据“黑胶白膜”制作三明治，即膜置于转膜夹芯正极一侧，凝胶置于转膜夹芯负极一侧，这样凝胶上带负电荷的蛋白才能转移到膜上。
蛋白转膜三明治制作：
负极（电转夹黑色面）-海绵垫-1层1 mm厚度滤纸-凝胶-膜-1层1 mm厚度滤纸-海绵垫-正极（电转夹白色面）
4. 转膜条件：
以下转膜条件仅供参考，客户针对自己的目的蛋白大小，最好经过1-2次预实验后，确定最佳的转膜条件。
蛋白大小 | 稳流 | 建议时间 | 降温措施 |
低于70kD | 150 mA | 1 小时 | 不需要 |
70-300 kD | 200 mA | 1.5-2 小时 | 需要 |
高于300 kD | 200 mA | 2.5-3.5 小时 | 需要 |
5. 进行后续WB操作：封闭-一抗-二抗-检测。
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