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超低分子量蛋白质Marker III（3.4-100kD）
Ultra Low Molecular Weight Protein Marker III
●产品编号及规格：
RTD6125 10T（50μl） 300元
● 储存条件：
-20℃保存，开封后有效期12个月。
● 产品简介：
本产品包含5种多肽和3种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.4kD-100kD。可以用来判断 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。
● 使用说明：
第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用；本产品为即用型，融化后既能使用，不能95℃加热处理。
一. 制胶：
I 配制分离胶
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（19:1）、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
2．加入10%APS和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
表一 （一块0.75mm mini胶用量）
| 分离胶 | 浓缩胶 |
| 18％T, 5%C /6.0 ml | 5％T, 3.3%C/2 ml |
40% PAA（19:1） | 2.7 ml | / |
40% PAA (29:1) | / | 0.25 ml |
4×凝胶缓冲液 | 1.5 ml | 0.5 ml |
乙二醇（电泳级） | 1.8 ml | / |
ddH2O | / | 1.25 ml |
10％APS | 50-65 μl | 20 μl |
TEMED | 6 μl | 2 μl |
注：如非必须，不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（29:1）和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
2．加入10%过硫酸铵和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
4．静置30-60分钟装待凝胶聚合
二. 电泳：
1. 取一管分装好的Marker样品，彻底融化，不要加热处理，充分混匀后备用。
2. 电泳前，将10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液（Cat No：CB010）用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的内外槽加入1×缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品（样品已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat No：TP050]处理）加入点样孔，根据表二条件进行电泳，至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽。
表二 多肽电泳条件
恒电压 | 150 V |
起始电流 | 45-55 mA |
结束电流 | 10-15 mA |
电泳时间 | 2-3小时 |
三. 染色
根据常规实验步骤，用配方5和6（表三）进行染色和观察。如果使用配方5进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的FastBlue蛋白染色液（Cat No：RTD6202），该产品能在5分钟之内完成蛋白的染色，不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离，是常规染色液的理想替代品。
表三 小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制
1. 40%PAA（29:1）（配制浓缩胶） 丙稀酰胺 38.67g 甲叉双丙稀酰胺 1.33g 用ddH2O溶解后定容至100 ml，过滤后使用。 贮存：4℃ | 2. 40% PAA（19:1） （配制分离胶） 丙稀酰胺 38 g 甲叉双丙稀酰胺 2 g 用ddH2O溶解后定容至100 ml，过滤后使用。 贮存：4℃ | 3. 4×凝胶缓冲液（配制凝胶用） [3MTris; 0.4% SDS; pH8.45]
Tris碱 36.3 g；ddH2O 80ml 0.4 g SDS或4 ml 10％ SDS 用HCl调pH值至8.45；用ddH2O定容至100 ml 贮存：4℃
|
4. 10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液 [1MTris;1MTricine ;1% SDS; pH 8.3] Tris碱 121.14g Tricine 179.2g SDS10g 用ddH2O溶解，定容至1000ml(不用调pH)。 贮存：4℃ 注：使用前稀释成1×缓冲液使用 | 5. 染色液 冰醋酸 100 ml 甲醇 450 ml 考马斯亮蓝G-250 0.25 g 水 450 ml
6. 脱色液 冰醋酸 100ml 水 900ml | 7. 2×Tricine蛋白样品上样缓冲液（10ml） 1ml 1MTris-Cl pH6.8 2.4ml 甘油 0.8g SDS 0.31g DTT（或者400μl β-巯基乙醇） 2mg 考马斯亮蓝G-250 用灭菌ddH2O定容至10ml 混匀分装-20℃贮存备用 |
多肽电泳配套试剂
名称 | 货号 | 规格 |
RTD6120 | 10次 | |
RTD6101 | 10次（100 μl） | |
RTD6125 | 10次（50 μl） | |
RTD6110 | 10次 （50 μl） | |
RTD6145-01 | 10次 （50 μl） | |
AC1914-01 | 100ml | |
AC2914-01 | 100ml | |
GB010-100ml | 100ml | |
TP050 | 10×1ml | |
RTD6202 | 500ml | |
EA0582-02 | 100 ml | |
CB010P | 500 ml | |
AB080 | 250 ml | |
CB010 | 100 ml |
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