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Bradford蛋白浓度测定试剂盒
名称 | 货号 | 规格 |
Bradford蛋白浓度测定试剂盒 | RTP7101 | 1000次（微孔板） |
● 试剂盒内容及保存：
货号 | 产品名称 | 包装 | 贮存方式 |
RTP7101-01 | 考马斯亮蓝G-250染色液 | 200 ml | 4℃ |
BSA-01 | 牛血清白蛋白(BSA)标准溶液（5 mg/ml） | 2×1 ml | -20℃ |
RT0280-02 | PBS溶液 | 10 ml | 4℃ |
| 说明书 | 1份 |
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● 储存条件和效期：
考马斯亮蓝G-250染色液4℃避光保存；牛血清白蛋白标准溶液-20℃贮存。PBS溶液4℃贮存。试剂盒常温运输；本试剂盒有效期1年。
● 产品简介：
Bradford蛋白质浓度测定试剂盒是根据考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）法研制而成，其原理是考马斯亮蓝G-250在酸性条件下和蛋白质结合，使得染料最大吸收峰从465 nm变为595 nm，在一定的线性范围内，反应液595 nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定595 nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。
每个试剂盒可以检测1000个样品（使用微孔板）或60个样品（使用试管）
● 产品特点：
1. 检测速度极快，10个样品只需不足10分钟即可完成。
2. 灵敏度高，检测浓度下限可达25 μg/ml （测定浓度范围在25-1000 μg/ml内有较好的线性关系，最佳测定浓度范围为50-750 μg/ml），最小检测蛋白量可达0.5 μg，待测样品体积为1-20 μl。
3. Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1 M，DTT的浓度可高达5 mM。然而，此方法测定蛋白浓度受高浓度的去垢剂影响，故不能适用膜蛋白样品的浓度测定。需确保测定样品中SDS浓度低于0.01%，Triton X-100浓度低于0.05%，Tween 20, 60, 80浓度低于0.015%。测定含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（RTP7102）。
● 操作方法
微孔板测定程序：（最优工作范围50-750 μg/ml）
1． G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀；
2． 1 mg/ml蛋白标准品配制：常温完全溶解蛋白标准品，取25 μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液，加入100 μl PBS溶液，使其终浓度为1 mg/ml。
3． 按照下表配制BSA标准测定溶液，建议做3个重复：
编号 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| 1 mg/ml BSA标准溶液 μl | |||||||
BSA标准溶液 μl | 0 | 1 | 1.5 | 2 | 3 | 6 | 10 | 15 |
PBS 溶液 μl | 20 | 19 | 18.5 | 18 | 17 | 14 | 10 | 5 |
BSA终浓度 μg/ml | 0 | 50 | 75 | 100 | 150 | 300 | 500 | 750 |
总体积 | 20 μl | |||||||
4． 将适当体积的待测样品加入到微孔板中，并用PBS补足到20 μl；
5． 向微孔板中加入200 μl G-250染色液，混匀，室温放置5分钟；
6． 测定595 nm 处的吸光值，并记录读数；以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。
7． 以BSA含量为纵坐标A595读数为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。
试管测定程序：（最优工作范围50-750 μg/ml）
1. G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀；
2. 1mg/ml蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品，取360 μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液，加入1440 μl PBS溶液，使其终浓度为1.0 mg/ml。
3. 按照下表配制BSA标准测定溶液，建议做3个重复：
编号 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| 1 mg/ml BSA标准溶液 μl | |||||||
BSA标准溶液 μl | 0 | 10 | 15 | 20 | 30 | 60 | 100 | 150 |
PBS 溶液 μl | 200 | 190 | 185 | 180 | 170 | 140 | 100 | 50 |
BSA终浓度 μg/ml | 0 | 50 | 75 | 100 | 150 | 300 | 500 | 750 |
总体积 | 200 μl | |||||||
4. 将适当体积的待测样品加入到试管中，并用PBS补足到200 μl；
5. 向试管中加入3ml G-250染色液，混匀，室温放置3-5分钟；
6. 测定595 nm 处的吸光值，并记录读数；以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。
7. 以BSA含量为纵坐标A595读数为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。
实验示例：
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商品DNase I溶液（蛋白提取用）
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商品100mM PMSF即用型溶液
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商品高分子量蛋白Marker（43-200KD）非预染
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商品Blu10 Plus Prestained Protein Ladder / BLUltra Prestained Protein Ladder（6.5 to 270 kDa） SIZE: 500 μ
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商品Chloroform Replacement Reagent(for Trizol)
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商品Isopropanol, HPLC, ACS Grade
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商品UMP, powder
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商品Fix-All 全效型組織固定液
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商品Leica CV Mount 封片膠
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商品Leica 哈里士蘇木紫染色液
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