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非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒（货号:RTD6130）
Native PAGE Gel Preparation and Electrophoresis Kit
● 产品组成：
货号 | 名称 | 规格 | 保存条件 |
AC2913-01 | 30%PAA(29:1) | 100 ml | 4℃ |
RTD6130-02 | 4×分离胶缓冲液 pH8.8 | 100 ml | 4℃ |
RTD6130-03 | 4×浓缩胶缓冲液 pH6.8 | 50 ml | 4℃ |
AP020P | APS（干粉） | 0.5 g | RT |
TA0761-01 | TEMED | 0.5 ml | 4℃，避光 |
PL111 | 5×非变性非还原蛋白上样缓冲液 | 1 ml | -20℃ |
TG130P | 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（干粉） | 1L | RT |
● 产品简介：
本公司提供的非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水。本试剂盒可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。本试剂盒可配制30-50块常规大小的非变性PAGE胶。
特别说明：由于本系统采用非连续Laemmli凝胶系统，分离胶pH为8.8，因此要求待分离的蛋白等电点pI≤7.0，这样蛋白在凝胶系统内带负电荷，在凝胶电泳中才能正常向正极泳动。如果待分离的蛋白等电点pI＞7.0，请选择碱性电泳凝胶系统分离（货号RTD6131）。
● 使用说明：
一 配制分离胶（各试剂使用量请参考表二）
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度（表一），再按照下面的分离胶配方表（表二）配制非变性PAGE的分离胶(即下层胶)。
表一 不同浓度的PAGE分离胶的最佳分离范围：
SDS-PAGE分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
6% | 50-150kD |
8% | 30-90kD |
10% | 20-80kD |
12% | 12-60kD |
15% | 10-40kD |
10% APS配制-5 ml：
将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。
制备分离胶步骤：
1．根据下表，将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%APS，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡
2．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
3．静置15-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
1．去除覆盖在分离胶上的水层。
2．按照表一将不同成分在一个小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%过硫酸铵，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
4．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
5．静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
三 电泳：
凝胶凝固好后，根据以下配方准备电泳缓冲液。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（不含SDS）的配制-1 L：将一包5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（此溶液不用调节pH值）。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。
在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等指示前沿溴酚兰电泳到分离胶下缘后，结束电泳，染色或者进行下一步实验。
实验示例
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