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Western无蛋白快速封闭液
Protein Free Rapid Blocking Buffer for WB
● 产品组成：
货号 | 名称 | 规格 | 保存条件 |
PF1070-100ml | Western无蛋白快速封闭液 | 100 ml | 2-8℃ |
PF1070-500ml | Western无蛋白快速封闭液 | 500 ml | 2-8℃ |
| 说明书 | 一份 |
|
● 产品简介：
本产品专为快速高效封闭Western Blot 转印膜而设计，采用无蛋白配方，避免抗体与封闭剂的非特异结合，最大程度地降低了背景。同时，本封闭剂无内源的磷酸化蛋白及生物素，对磷酸化特异抗体及生物素检测也不会产生干扰。本封闭剂不与蛋白产生非特异性结合，因而只封闭膜而不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点，大大提高了抗体检测灵敏度。实验表明，本封闭剂对许多抗体都有不同程度的信号增强作用。然而这种信号增强作用因抗体而异，对某一特定抗体，并不一定具有确定的信号增强作用。
注意： 没有任何一种封闭剂能适合所有抗原和抗体的检测系统。如出现本试剂不适合的抗体，请替换使用其它种类的封闭剂如BSA或脱脂奶粉等。
● 贮存：
2-8℃贮存，有效期一年。
● 注意事项：
1. 快速高效：10-60 min内完成封闭；只结合封闭转印膜而不结合蛋白，因此不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点，与传统的脱脂奶粉和BSA 封闭相比信噪比更高；
2. 方便快捷：无需稀释，即取即用；
3. 性能可靠：无蛋白配方，与抗体无交叉反应；
4. 应用范围广：无磷酸化蛋白，无生物素，尤其适合磷酸化特异抗体及生物素检测系统；
5. 节省抗体：使用本封闭剂后，所需的最适抗体浓度低于常规使用浓度，可大大节省抗体使用量。
6. 与PVDF膜相比，NC膜需要更长时间的封闭。
● 使用说明：
1. 本产品无需稀释，开盖即用。
2. 完成转膜后，使用TBST漂洗转印膜3次，每次5分钟；
3. 将转印膜放入到杂交孵育盒中，加入10-20 ml 无蛋白快速封闭液完全覆盖转印膜，置于摇床轻轻摇动，参考下表确定封闭时间：
膜类型 | 推荐封闭时间 | 反应温度 |
PVDF膜 | 10-20分钟 | 常温 25度 |
NC膜 | 40-60 分钟 | 常温25度 |
注意：使用本产品，PVDF膜和NC膜使用推荐封闭时间，经多种抗体的测试封闭效果显著优于常规的BSA封闭1 h。对于一些背景非常高的抗体，可以尝试延长封闭时间。如有特殊需要，也可4℃封闭过夜。
4. 封闭结束后弃去封闭液，进行Western Blot后续操作。
● 实验示例：
Jurkat细胞总蛋白GAPDH检测
电泳条件：200 V 1×TGS 40-12 mA 53 min
转膜条件：NC膜，1×RealBlot快速转膜液(Cat:RT5020)
恒流400 mA 35 min 65-59 V
封闭：无蛋白封闭液（Cat：PF1070） RT 60 min
一抗：兔GAPDH多抗(Cat: RGA1040) 1:2000 过夜4℃孵育
二抗：羊抗兔IgG-HRP(Cat: RGA1040) 1:5000 RT 60min
ECL发光：RealECL发光液（Cat:EC2520 ） 10秒曝光
植物叶绿体LHCa3检测
Electrophoresis: 10% RealPAGE SDS Electrophorosis(RTD6148)
Transfer: 1×RealBlot transfer buffer(Cat:RT5020)
350 mA blotting to NC membrane for 30 min.
Blocking: 无蛋白封闭液（Cat:PF1070） RT for 20 min;
BSA at RT for 1 h.
Primary antibody: Lhca3（Cat:RGL2080） 1:2000 dilution at RT for 1h
Secondary antibody: 1:5000 dilution using Goat Anti-Rabbit IgG AP(Cat:AGR1030)
Detection: using BCIP/NBT(Cat:BN1026) at RT for 5 min
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