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非变性蛋白电泳Marker转膜问题
http://www.real-times.com.cn/news_detail.aspx?NewsID=248
宽分子量非变性电泳蛋白质Marker（21-880 kD）
Broad MW Native Electrophoresis Protein Marker（21-880 kD）
●产品编号及规格：
RTD6144 20次 100 μl
●储存及运输条件：
-20℃保存，湿冰运输，有效期为12个月。
● 产品简介：
本产品有5种蛋白组成，分子量范围为21-880 kD，经过非变性电泳后，用考马斯亮蓝染色后可以得到5条主带。
蛋白名称 | 分子量(kD) | 蛋白来源 | pI | 说明 |
Ferritin | 440 880 | equine spleen | N/A | 非变性下440kD和880 kD |
Carbonic Anhydrase | 300 | Bovine Erythrocytes | 6.4 | 单体分子量29kD，非变性下为10聚体，低于300kD有电荷异构体（charge isomer） |
Lactic Dehydrogenase | 165 | Microorganism | 4.5 | 球蛋白，单体分子量36 kD，非变性下可形成四聚体 |
Ovalbumin | 45 | egg white | 4.71或4.59 | 球蛋白，分子量为45kD，非变性条件下大于45kD会出现电荷异构体（charge isomer） |
Trypsin Inhibitor | 21 | Soybean | 4.5 | 非变性下21 kD |
● 使用说明：
1. 取出产品后，常温融化后，彻底混匀，上样电泳。
注：上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来，1.0厚度10齿梳子加样孔上样5 μl，1.0厚度15齿梳子加样孔上样量2.5 μl，其他规格梳子请适当调整上样量。
2. 该产品不含蛋白凝胶制备试剂，您可以选择非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒（货号：RTD6130）或者蛋白预制胶（货号RTD6118）。如自备试剂，经典Laemmli系统中把制胶溶液、电泳缓冲液和上样缓冲液中的SDS和还原剂（DTT或β-巯基乙醇）全部去除即可进行非变性电泳。
3. 电泳条件：
建议使用10%非变性胶或者4-20%梯度非变性胶（货号：RTD6118-0420）进行电泳。
恒电压 | 120 V |
起始电流 | 27-35 mA/板胶 |
结束电流 | 7-10 mA/板胶 |
电泳时间 | 1h20min+ |
4. 电泳结束后，考马斯亮蓝染色，观察结果。
注：使用银染染色时，由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法，需要适当降低Marker上样量，一般稀释50倍后上样。
注意：
1. 本蛋白Marker不适用于变性蛋白电泳（SDS-PAGE），因为在SDS存在下，含有多个亚单位的蛋白会不同程度解聚。
2. 在非变性条件下，蛋白的迁移与蛋白的电荷、蛋白形状以及蛋白分子量都有关。因此，在一种凝胶浓度下使用本Marker不能精确估计出目的蛋白的分子量。非变性电泳中，蛋白分子量的确定应该是在不同凝胶浓度下，确定出蛋白的Rf值，绘制出凝胶浓度对Rf的曲线从而判定蛋白的分子量。
● 实验示例：
1 4-20% Tris-甘氨酸 非变性胶电泳：
4-20% RealPAGE Precast Gel
1×TG 200V 50-19mA 47min
2. 4-16% Blue Native：
3： 4-15% Tris-甘氨酸非变性：
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