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1×Western湿转转膜缓冲液（粉末型）
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
TB1030P | 1×Western湿转转膜缓冲液（粉末型） | 10×1升 |
● 简介：
1×Western湿转转膜缓冲液（粉末型）可以用于Western时湿转转膜，原始配方是 Towbin buffer（1×）(Towbin et al. PNAS 1979，76:4350-4): 25 mM Tris, 192 mM glycine, 10-20 % 甲醇, SDS 0.01-0.1 %，pH ~8.3。为方便客户使用，1×转膜缓冲液（粉末型）中没有添加甲醇和SDS，客户根据需要配制1×转膜缓冲液时自行添加。
● 保存、运输和贮存：
常温保存，有效期两年。配成溶液后建议4℃保存，有效期6个月。
加入甲醇或/和SDS的1×即用型转膜缓冲液建议现用现配，不建议保存。
● 1×即用型转膜缓冲液配制方法：
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| 1×即用型转膜缓冲液 配制量 1升 | |
| 1×Western湿转转膜缓冲液（粉末型） | 一袋粉末 | |
| 超纯水 | 约600 ml | |
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| 变性蛋白 | 非变性蛋白 |
＜20 kD蛋白 | 无水甲醇 | 20% | 5-10% |
SDS | 0.01% | 0.01% | |
20-80 kD蛋白 | 无水甲醇 | 10% | 0-5% |
SDS | 0.05% | 0.05% | |
＞80 kD蛋白 | 无水甲醇 | 10%（NC膜） 0-5%（PVDF膜） | 0% |
SDS | 0.1% | 0.1% | |
| 超纯水 | 定容至1升，不要调节pH，pH~8.3 | |
注：甲醇和SDS在转膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加结合在膜上，而SDS让蛋白更加离开膜。因此对大蛋白转膜来说，多加SDS，少加甲醇；而对小蛋白转膜，多加甲醇，少加SDS。
● 转膜：
1. 膜的选择：转膜可以选择PVDF膜或NC膜。根据蛋白大小选择膜的孔径。一般说来，大于20 kD蛋白选择0.45 μm孔径，低于20 kD选择0.22 μm孔径。PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿活化。
蛋白转膜三明治制作：
负极（电转夹黑色面）-海绵垫-1层1 mm厚度滤纸-凝胶-膜-1层1 mm厚度滤纸-海绵垫-正极（电转夹白色面）
3. 转膜条件：
以下转膜条件仅供参考，客户针对自己的目的蛋白，最好经过1-2次预实验后，确定最佳的转膜条件。
膜孔径 | 蛋白大小 | 稳流 | 建议时间 | 降温措施 |
0.22 μm | 低于20 kD | 200 mA | ~30分钟 | 不需要 |
0.45 μm | 20-50 kD | 300 mA | ~45分钟 | 需要 |
0.45 μm | 50-200 kD | 350 mA | ~50分钟 | 需要 |
0.45 μm | 高于200 kD | 350 mA | ~2.5-4.5小时 | 需要 |
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