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SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒（货号:RTD6116）
● 产品组成：
货号 | 名称 | 规格 | 保存条件 |
AC2914-01 | 40%PAA(29:1) | 100 ml | 4℃ |
TS050-01 | 4×Tris/SDS分离胶缓冲液 pH8.8 | 100 ml | 4℃ |
TS030-01 | 4×Tris/SDS浓缩胶缓冲液 pH6.8 | 50 ml | 4℃ |
AP020P | APS（干粉） | 0.5 g | RT |
TA0761-01 | TEMED | 0.5ml | 4℃，避光 |
PL080-01 | 5×MonoColor蛋白上样缓冲液（含还原剂） | 1 ml | -20℃ |
TG120P | 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（干粉） | 1 L | RT |
| 说明书 | 一份 |
|
● 产品简介：
本公司提供的SDS-PAGE蛋白电泳试剂盒包含凝胶制备以及蛋白电泳所需的全部试剂。本试剂盒可配制至少50块常规大小的PAGE胶。
● 使用说明：
一 配制分离胶（各试剂使用量请参考表二）
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度（表一），再按照下面的分离胶配方表（表二）配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)。
表一 不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：
SDS-PAGE分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
6% | 50-150kD |
8% | 30-90kD |
10% | 20-80kD |
12% | 12-60kD |
15% | 10-40kD |
配制分离胶前，根据以下配方准备10% APS：
10% APS配制-5 ml：将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10%APS。
制备分离胶步骤：
1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2．按照表二将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合
表二 SDS-PAGE分离胶配方表
组份 | 不同凝胶体积对应各组份的取样量（ml） | |||
6％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml | ||||
H2O | 3 | 6 | 9 | 12 |
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8 | 1.25 | 2.5 | 3.75 | 5 |
40％ PAA（29:1） | 0.75 | 1.5 | 2.25 | 3 |
TEMED | 0.005 | 0.01 | 0.015 | 0.02 |
10％ APS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
8％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml | ||||
H2O | 2.7 | 5.4 | 8.1 | 10.8 |
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8 | 1.25 | 2.5 | 3.75 | 5 |
40％ PAA（29:1） | 1 | 2 | 3 | 4 |
TEMED | 0.005 | 0.01 | 0.015 | 0.02 |
10％ APS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
10％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml | ||||
H2O | 2.45 | 4.9 | 7.35 | 9.8 |
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8 | 1.25 | 2.5 | 3.75 | 5 |
40％ PAA（29:1） | 1.25 | 2.5 | 3.75 | 5 |
TEMED | 0.005 | 0.01 | 0.015 | 0.02 |
10％ APS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
12％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml | ||||
H2O | 2.2 | 4.4 | 6.6 | 8.8 |
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8 | 1.25 | 2.5 | 3.75 | 5 |
40％ PAA（29:1） | 1.5 | 3 | 4.5 | 6 |
TEMED | 0.005 | 0.01 | 0.015 | 0.02 |
10％ APS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
15％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml | ||||
H2O | 1.825 | 3.65 | 5.475 | 7.3 |
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8 | 1.25 | 2.5 | 3.75 | 5 |
40％ PAA（29:1） | 1.875 | 3.75 | 5.625 | 7. |
TEMED | 0.005 | 0.01 | 0.015 | 0.02 |
10％ APS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 |
二 浓缩胶制备：
1．去除覆盖在分离胶上的水层。
2．按照表三将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合；加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
4．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
5．静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
表三 SDS-PAGE浓缩胶(4%)配方表
组份 | 不同凝胶体积对应各组份的取样量（ml） | |||
2 ml | 4 ml | 5 ml | 10 ml | |
H2O | 1.3 | 2.6 | 3.25 | 6.5 |
4×Tris/SDS浓缩胶buffer pH6.8 | 0.5 | 1 | 1.25 | 2.5 |
40％ PAA（29:1） | 0.2 | 0.4 | 0.5 | 1 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.005 | 0.01 |
10％ APS | 0.02 | 0.04 | 0.05 | 0.1 |
三 电泳：
凝胶凝固好后，根据以下配方准备电泳缓冲液。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液的配制-1 L：将一包5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（此溶液不用调节pH值）。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。
在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等指示前沿溴酚兰电泳到分离胶下缘后，结束电泳，染色或者进行下一步实验。
下一步实验。
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